E. D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elansky
Oomiceta Phytophthora infestantes (Mont) de Bary causa a requeima, uma doença perigosa da batata e do tomate. Uma das principais fontes de inóculo primário P. infestans são estruturas reprodutivas em repouso de paredes espessas - oósporos.
Oósporos híbridos resultantes do cruzamento de linhagens parentais geneticamente diferentes contribuem para o aumento da diversidade genotípica na população, com o que se acelera o processo de adaptação das linhagens a novas variedades e fungicidas aplicados.
Formação de oósporos P. infestans no campo foi notado em muitos países do mundo: Rússia (Smirnov et al., 1999), Noruega (Hermansen et al., 2002), Suécia (Strömberg et al., 2001), Holanda (Kessel et al., 2002) e outros regiões. Oósporos são capazes de persistir no solo em um estado viável por mais de 2 anos (Bødker et al., 2006) e causar infecção de plantas após a hibernação (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
Anteriormente, foi mostrado que as folhas das plantas de diferentes camadas do arbusto da batata apresentam diferenças na resistência à requeima; aumenta das folhas inferiores para as superiores. Esta tendência não depende da idade da folha, idade da planta ou variedade da batata (Vesper et al., 2003). Ao mesmo tempo, não encontramos dados sobre as diferenças na intensidade de formação de oósporos nas folhas de diferentes camadas do arbusto de batata na literatura. No entanto, se tais diferenças existirem, elas devem ser levadas em consideração ao coletar amostras de folhas para a análise da formação de oósporos e ao interpretar os resultados obtidos por outros autores. O objetivo deste trabalho foi estudar a formação de oósporos nas folhas destacadas de diferentes camadas de uma planta de batata colocada nas mesmas condições em câmaras úmidas.
materiais e métodos
Usamos 5 isolados P. infestans diferentes tipos de acasalamento isolados de amostras afetadas trazidas das regiões de Moscou, Ryazan e Leningrado. Deles, 3 pares de cepas de diferentes tipos de acasalamento foram selecionados, dando abundantes oósporos quando testados em meio de aveia ágar.
Para o teste, usamos plantas de batata sem vírus das seguintes variedades cultivadas em uma estufa (em um substrato de turfa): primeiro Sandrin, Zorachka, Uladar, Osiris, meio-início Ilyinsky, meio-temporada Yanka.
Folhas simples de diferentes níveis da planta de batata foram selecionadas para análise. Três folhas foram selecionadas do nível inferior (4 folhas compostas inferiores), três do topo (3-4 folhas compostas no topo) e três folhas do centro do arbusto. Folhas simples foram pesadas, fotografadas em papel coordenado (para cálculo de volume e área), e colocadas de cabeça para baixo sobre água estéril, vertidas 25 ml em placas de Petri. Em seguida, cada folha foi infectada com uma gota de uma suspensão mista de isolados de zoosporangia A1 e A2 do tipo de acasalamento. Para três folhas coletadas em cada nível, um inóculo de três pares diferentes de isolados foi usado. Uma folha foi infectada com uma mistura de inóculo de um par de isolados.
Para preparar uma suspensão de zoosporangia, isolados de diferentes tipos de acasalamento foram cultivados em meio ágar aveia por 7 dias, após o qual os zoosporangia foram lavados com água destilada estéril. A concentração do inóculo era de 5-7 zoósporos no campo de visão do microscópio com ampliação de 80x. Cada folha foi contaminada com uma gota de uma suspensão mista de isolados de zoosporangia A1 e tipo de acasalamento A2.
Em todos os experimentos, foram utilizadas 3 folhas de batata por variante. Após incubação por 20 dias a 18 ° C, cada folha foi homogeneizada em um almofariz com 2 ml de água destilada. Da suspensão resultante, foram retiradas 3 amostras, a partir das quais foram preparadas preparações para microscopia.
Em cada variante, 180 campos visuais foram examinados, após os quais o número de oósporos foi recalculado por 1 mm2 superfície da folha. Os resultados da contagem para cada variante foram calculados.
Para calcular o intervalo de confiança (μ) para um nível de significância de 0,05, a seguinte fórmula foi usada
onde s é o desvio padrão, n é o número de medições, t é a constante do teste t para um nível de significância de 0,05. Todos os cálculos foram realizados em Excel (pacote Microsoft Office).
Resultados e discussão
A inoculação de folhas coletadas em diferentes camadas de um arbusto de batata e colocadas nas mesmas condições em câmaras úmidas revelou diferenças na intensidade de formação de oósporos. Em todas as variedades estudadas, o número máximo de oósporos foi formado durante a inoculação das folhas coletadas nas camadas inferior e média do arbusto. Não foram encontradas diferenças significativas na formação de oósporos nas folhas inferior e média.
O número mínimo de oósporos foi formado nas folhas da camada superior (Fig. 1).
Nas folhas das camadas inferior e média, o número máximo de oósporos foi formado nas variedades Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar e Osiris. Eles foram formados com menos intensidade nas folhas da variedade Yanka. O número máximo de oósporos nas folhas da camada superior foi observado nas folhas da variedade Uladar, seguida de Zorachka, Osiris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin em ordem decrescente, porém nem todas as diferenças foram estatisticamente significativas.
Figura: 1. Formação de oósporos nas folhas de diferentes camadas do arbusto da batata. As mais baixas são as folhas dos três níveis inferiores do arbusto, as superiores são 3-4 folhas complexas do topo da planta, as do meio são do meio do arbusto.
As barras de erro mostram o intervalo de confiança para um nível de significância de 0,05.
No campo, as condições microclimáticas também contribuem para a formação de oósporos nas folhas inferiores e médias do arbusto: maior umidade, menor insolação solar e flutuações diárias de temperatura (Harrison, 1992). A pulverização superior resulta em menos pesticidas na parte inferior e central do arbusto. Para reduzir a formação de oósporos, devem ser utilizadas tecnologias que permitam a distribuição bem-sucedida de fungicidas nas partes inferior e intermediária do arbusto. Bons resultados podem ser obtidos usando pulverizadores de ar turbulento e fungicidas sistêmicos que podem se espalhar para as partes não tratadas do arbusto.
Este trabalho foi apoiado pela Russian Science Foundation (projeto No. 14-50-00029).
O artigo foi publicado na revista "Potato Protection" (No. 2, 2015)